12 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Сдать анализ на антитела к лимфоцитам методом непрямой иммунофлюоресценции

Антитела к лимфоцитам методом непрямой иммунофлюоресценции

Выявление в крови антилимфоцитарных антител, появление которых ведет к нарушению функции лимфоцитов и всей иммунной системы в целом, может быть причиной возникновения лимфоцитопенических и лейкоцитопенических состояний.

Антитела к лимфоцитам, АТ к лимфоцитам.

Синонимы английские

Antibodies to lymphocytes.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Общая информация об исследовании

Лимфоциты являются клетками иммунной системы, представляют собой один из подвидов лейкоцитов – агранулоциты, т.к. не содержат в составе своей цитоплазмы гранул. Функция лимфоцитов заключается в обеспечении иммунных реакций организма.

Лимфоциты подразделяются на две большие группы:

— В-лимфоциты, отвечающие за гуморальный иммунитет посредством выработки иммуноглобулинов;

— Т-лимфоциты, осуществляющие клеточный иммунитет и участвующие в реакциях гуморального ответа, т.к. данные клетки первыми сталкиваются с попавшими в организм чужеродными антигенами, способны вырабатывать клетки памяти к каждому конкретному антигену, клетки-супрессоры (сразу подавляют иммунные реакции), клетки-хелперы (осуществляют переход с одного вида иммунных реакций на другой).

При развитии патологического процесса в иммунной системе лимфоциты способны начать вырабатывать аутоиммунные антитела по отношению к самим себе, что ведет к несостоятельности иммунного ответа при попадании в организм антигенов. Антитела к лимфоцитам могут вырабатываться отдельно к Т- или В-клеткам либо к обеим группам сразу. Это чаще всего происходит при различных онкогематологических заболеваниях, а также может быть при лейкоцитопении и лимфоцитопении другой этиологии.

Определение антител к лимфоцитам происходит посредством реакции иммунофлюоресценции, суть которой заключается во взаимодействии антител с антигенами. Для обнаружения антилимфоцитарных антител к исследуемому образцу венозной крови добавляют специфические к ним антигены, которые способны вместе образовать определенный комплекс. Реакцию между ферментом и комплексом антиген-антитело в виде субстрата можно наблюдать в микроскопе, что позволяет оценить качественно и количественно наличие искомых антилимфоцитарных антител.

Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии антител к лимфоцитам. Положительный результат позволяет говорить о наличии аутоиммунных антител, что свидетельствует о нарушении лимфоцитарного звена иммунной системы. Это может быть следствием онкологического процесса (чаще – онкогематология), лимфоцитопении или лейкоцитопении, возникшим по другим причинам. Также наличие антител к лимфоцитам иногда проявляется в связи с переливанием крови как посттрансфузионное осложнение.

Одного анализа недостаточно для постановки достоверного диагноза. Точное заключение может быть дано только специалистом на основе комплексного обследования.

Для чего используется исследование?

  • Для оценки состояния лимфоидного звена иммунной системы.

Когда назначается исследование?

  • При обнаружении лимфоцитопении (сниженного числа лимфоцитов);
  • при обнаружении лейкоцитопении (сниженного числа лейкоцитов);
  • при наличии онкологического процесса (особенно онкогематологического).

Что означают результаты?

  • Клинический анализ крови: общий анализ, лейкоцитарная формула, СОЭ (с микроскопией мазка крови при выявлении патологических изменений)

Кто назначает исследование?

Гематолог, терапевт, врач общей практики.

Литература

  • Heyworth MF, Truelove SC. Cytotoxic effect of anti-lymphocytic globulin on human lymphoid cells. Ric Clin Lab. 1979 Oct-Dec; 9(4):345-50.
  • Morikawa S. Specificity of anti-lymphocytic antibody and antigenicity of lymphoid cells. Bull Chest Dis Res Inst Kyoto Univ. 1972 Jan;5(1):27-8.
  • James K. Studies with anti-lymphocytic antibody and antibody-fragments. Prog Immunobiol Stand. 1970;4:256-64.
  • James K. Anti-lymphocytic antibody—a review. Clin Exp Immunol. 1967 Nov; 2(6):615-31.

Реакции непрямой иммунофлюоресценции (РИФ) (экспресс-диагностика и серологическая диагностика гриппа А)

В настоящее время широко применяются серологические реакции (СР), в которых участвуют меченые АГ или АТ. К ним относятся реакция иммунофлюоресценции, радиоиммунный и иммуноферментный методы, реакция иммуноблотинга, проточная цитометрия и электронная микроскопия.

1) для серодиагностики инфекционных заболеваний, т. е. для выявления АТ с помощью набора известных конъюгированных (химически соединённых) с различными метками (ферментами, флюорохромными красителями), антигенов;

2) для определения микроорганизма или его серовара с помощью стандартных меченных диагностических антител (экспресс-диагностика).

Готовят диагностические сыворотки иммунизацией животных соответствующим АГ, затем выделяют иммуноглобулины и конъюгируют их со светящимися красителями (флюорохромами), ферментами, радиоизотопами.

Диагностических моноклональных антител получают с помощью гибридных клеток, образованных путем слияния иммунного В-лимфоцита с миеломной клеткой. Гибридомы способны быстро размножаться in vitro в культуре клеток и продуцировать при этом иммуноглобулин, характерный для взятого В-лимфоцита.

Читать еще:  Сдать анализ на аллерген f50 скумбрия igg

Меченые СР по специфичности не уступают другим СР, а по своей чувствительности они превосходят все СР.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

В качестве метки используются светящиеся флюорохромные красители (изотиоционат флюоресцеина и др.).

Существуют различные модификации РИФ. Для экспресс – диагностики инфекционных заболеваний — для выявления микробов или их антигенов в исследуемом материале применяется РИФ по Кунсу.

Выделяют два метода РИФ по Кунсу: прямой и непрямой.

Компоненты прямой РИФ:

1) исследуемый материал (испражнение, отделяемое носоглотки и др.);

2) меченая специфическая иммунная сыворотка, содержащая АТ к искомому антигену;

3) изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала обрабатывают меченой антисывороткой.

Происходит реакция АГ-АТ. При люминесцентном микроскопическом исследовании в том участке, где локализуются комплексы АГ-АТ, обнаруживают флюоресценцию метки (рис.34).

Компоненты непрямой РИФ, предназначенной для экспреесс-диагностики гриппа А:

1) исследуемый материал смыв с носоглотки больного с подозрением на грипп;

2) специфическая антисыворотка с антителами против вируса гриппа А;

3) антиглобулиновая сыворотка (АТ против иммуноглобулина), меченная флюорохромом;

4) изотонический раствор хлорида натрия.

Мазок из исследуемого материала сначала обрабатывают иммунной сывороткой к искомому антигену, а затем – меченной антиглобулиновой сывороткой.

Иммунные комплексы АГ-АТ – меченные АТ обнаруживаются при помощи люминесцентного микроскопа.

Преимущество непрямого метода состоит в том, что нет необходимости приготовления широкого набора флюоресцирующих специфических сывороток, а применяется лишь одна флюоресцирующая антиглобулиновая сыворотка.

Для серологической диагностики гриппа А,то есть для определения антител против вируса гриппа А в сыворотке крови с помощью непрямой РИФиспользуют гриппозный диагностикум (антиген вируса гриппа А). Серодиагностика вирусных инфекций в основном носит ретроспективный характер и применяется для подтверждения диагноза и эпидемиологического анализа.

Иммуноферментный анализ (ИФА): конкуретный способ (определение HBs-АГ вируса гепатита В) и непрямой способ (серологическая диагностика ВИЧ — инфекции)

Иммуноферментный анализ (ИФА)

В качестве метки используются ферменты: пероксидаза, щелочная фосфатаза и др.

Индикатором реакции является способность ферментов вызывать цветные реакции при действии на соответствующий субстрат. Например, субстратом для пероксидазы является раствор ортофенилдиамина (ОФД) или тетраметилбензидин (ТМБ).

Наиболее широко применяется твердофазный ИФА (рис.35), непрямой и конкурентные способы (рис.36).

Результаты ИФА можно оценить визуально и измерением оптической плотности на спектрофотометре (ИФА – анализаторе).

К преимуществам ИФА следует отнести:

— простота методов оценки реакции;

— легко поддаётся автоматизации.

В качестве примеров приводятся следующие типы ИФА:

А) конкурентный тип

Предназначен для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В (HBs Ag) в сыворотках и плазме крови при диагностики вирусного гепатита В и определения носительства HBs Ag.

1) исследуемый материал – сыворотка или плазма крови;

2) антитела к HBs Ag, адсорбированные на поверхности лунки полистиролого микропланшета;

3) конъюгат – мышиные моноклональные антитела к HBs Ag, меченые пероксидазой;

4) ортофенилендиамин (ОФД) – субстрат;

5) фосфатно – солевой буфер;

6) контрольные сыворотки:

— положительная (сыворотка с HBs Ag);

— отрицательная (сыворотка без HBs Ag).

1. Внесение контрольных и исследуемых сывороток.

2. Инкубация 1 час при 37°С.

3. Отмывание лунок.

4. Внесение конъюгата.

5. Инкубация 1 час при 37°С.

6. Отмывание лунок.

7. Внесение ОФД. При наличии HBs Ag раствор в лунках желтеет.

8. Учёт ИФА проводят по оптической плотности с помощью фотометра. Степень оптической плотности будет обратно пропорциональной концентрации исследуемых HBs Ag.

Реакция протекает в три фазы:

1. HBs Ag исследуемой сыворотки (плазмы) связывается с гомологичными АТ, адсорбированными на поверхности лунки. Образуется ИК АГ-АТ. (HBs Ag – anti HBs АТ).

2. Антитела к HBs Ag, меченые пероксидазой связываются с оставшимися свободными детерминантоми HBs Ag комплекса АГ-АТ. Образуется комплекс АТ-АГ-меченые АТ (anti HBs АТ — HBs Ag — anti HBs АТ, меченые пероксидазой).

3. ОФД взаимодействуют с пероксидазой комплекса АТ-АГ-АТ и происходит жёлтое окрашивание.

В) непрямой тип

Является основной тестовой реакцией диагностики ВИЧ – инфекции.

Цель: Серологическая диагностика ВИЧ-инфекции – обнаружение антител к антигенам ВИЧ.

Читать еще:  Сдать анализ на treponema pallidum антитела

1) исследуемый материал – сыворотка крови (АТ к АГ-м ВИЧ);

2) синтетические пептиды имитирующие 2-х антигенов ВИЧ: gp 120 и gр 41, адсорбированные на поверхности полистироловой лунки;

3) антиглобулиновая сыворотка, меченная пероксидазой, полученная путём иммунизации кроликов глобулинами человека (АТ к АТ);

5) фосфатно-солевой буфер;

6) контрольные сыворотки:

1. Внесение контрольных и исследуемых сывороток.

2. Инкубация 30 минут при 37°С.

4. Внесение антиглобулиновой сыворотки меченой ферментом.

5. Инкубация 30 минут при 37°С.

Реакция протекает в 3 фазы:

1. Антитела к ВИЧ исследуемой сыворотки связываются с гомологичными антигенами (gр 120 и gр 41), и на поверхности сорбента образуется ИК АГ-АТ ( АГ ВИЧ — АТ к ВИЧ).

2. Образование ИК АГ-АТ-АТ, меченое пероксидазой, т.к. АТ исследуемой сыворотки являются антигенами для антиглобулиновой сыворотки.

3. ОФД взаимодействует с пероксидазой комплекса АГ-АТ-АТ, и происходит жёлтое окрашивание раствора лунки. Степень ферментативной активности прямо пропорциональна концентрации исследуемых АТ.

Дата добавления: 2018-02-28 ; просмотров: 1818 ;

52-20-983. Антитела к лимфоцитам IgG

Номенклатура МЗРФ (Приказ №804н): A12.06.012.002.01 «Определение содержания антител класса G (IgG) к лимфоцитам в крови»

Биоматериал: Сыворотка крови

Срок выполнения (в лаборатории): 7 р.д. *

Описание

Лимфоциты являются клетками иммунной системы, представляют собой один из подвидов лейкоцитов – агранулоциты, т.к. не содержат в составе своей цитоплазмы гранул. Функция лимфоцитов заключается в обеспечении иммунных реакций организма. Лимфоциты подразделяются на две большие группы: — В-лимфоциты, отвечающие за гуморальный иммунитет посредством выработки иммуноглобулинов; — Т-лимфоциты, осуществляющие клеточный иммунитет и участвующие в реакциях гуморального ответа, т.к. данные клетки первыми сталкиваются с попавшими в организм чужеродными антигенами, способны вырабатывать клетки памяти к каждому конкретному антигену, клетки-супрессоры (сразу подавляют иммунные реакции), клетки-хелперы (осуществляют переход с одного вида иммунных реакций на другой). При развитии патологического процесса в иммунной системе лимфоциты способны начать вырабатывать аутоиммунные антитела по отношению к самим себе, что ведет к несостоятельности иммунного ответа при попадании в организм антигенов. Антитела к лимфоцитам могут вырабатываться отдельно к Т- или В-клеткам либо к обеим группам сразу. Это чаще всего происходит при различных онкогематологических заболеваниях, а также может быть при лейкоцитопении и лимфоцитопении другой этиологии. Определение антител к лимфоцитам происходит посредством реакции иммунофлюоресценции, суть которой заключается во взаимодействии антител с антигенами. Для обнаружения антилимфоцитарных антител к исследуемому образцу венозной крови добавляют специфические к ним антигены, которые способны вместе образовать определенный комплекс. Реакцию между ферментом и комплексом антиген-антитело в виде субстрата можно наблюдать в микроскопе, что позволяет оценить качественно и количественно наличие искомых антилимфоцитарных антител. Отрицательный результат свидетельствует об отсутствии антител к лимфоцитам. Положительный результат позволяет говорить о наличии аутоиммунных антител, что свидетельствует о нарушении лимфоцитарного звена иммунной системы. Это может быть следствием онкологического процесса (чаще – онкогематология), лимфоцитопении или лейкоцитопении, возникшим по другим причинам. Также наличие антител к лимфоцитам иногда проявляется в связи с переливанием крови как посттрансфузионное осложнение.

Показания к назначению

Антитела к лимфоцитам направлены к поверхностным антигенам лимфоцитов. Они указывают на риск лимфопении при системной красной волчанке и отмечаются у 30-40% больных СКВ, поэтому их относят к числу частых маркеров этого заболевания. Для чего используется исследование? Для оценки состояния лимфоидного звена иммунной системы. Когда назначается исследование? При обнаружении лимфоцитопении (сниженного числа лимфоцитов); при обнаружении лейкоцитопении (сниженного числа лейкоцитов); при наличии онкологического процесса (особенно онкогематологического).

Интерпретация результатов/Информация для специалистов

* На сайте указан максимально возможный срок выполнения исследования. Он отражает время выполнения исследования в лаборатории и не включает время на доставку биоматериала до лаборатории.
Приведенная информация носит справочный характер и не является публичной офертой. Для получения актуальной информации обратитесь в медицинский центр Исполнителя или call-центр.

Сдать анализ на антитела к лимфоцитам методом непрямой иммунофлюоресценции

Мозаика «Респираторный тракт» (IgM), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител класса IgM к следующим инфекциям:

  1. RSV (pеспираторно-синцитиальный вирус).
  2. Adenovirus type 3
  3. Influenza virus type A (H1N1)
  4. Influenza virus type A (H3N2)
  5. Influenza virus type B
  6. Parainfluenza virus type 1
  7. Parainfluenza virus type 2
  8. Parainfluenza virus type 3
  9. Parainfluenza virus type 4
  10. Bordetella pertussis
  11. Bordetella parapertussis
  12. Mycoplasma pneumoniae
  13. Coxsackie virus тип B1
  14. Coxsackie virus тип A7
  15. Echo virus тип 7
  16. Chlamydia pneumoniae
  17. Haemophilus influenzae
  18. Klebsiella pneumoniae
  19. Legionella pneumophila серотип 16
  20. Legionella pneumophila серотип 126
Читать еще:  Сдать анализ на аллергокомплекс педиатрический rida screen 4 ige

Результат: качественно, отдельно по каждой позиции в формате: «Отрицательный» или «Положительный».

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: терапевты, инфекционисты, пульмонологи и др.

Мозаика «Центральная нервная система», (IgG), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител класса IgG к следующим инфекциям:

  1. Rubella virus
  2. Measles
  3. Mumps
  4. Varicella zoster virus
  5. Adenovirus type 3
  6. EBV, капсидный антиген
  7. Treponema pallidum
  8. Toxoplasma gondii
  9. HSV type 1
  10. HSV type 2
  11. Coxsackie virus type B1
  12. Coxsackie virus type A7
  13. Echovirus тип 7
  14. Borrelia afzelii
  15. Borrelia burgdorferi sensu stricto
  16. Borrelia garinii
  17. CMV
  18. Haemophilus influenzae
  19. Listeria monocytogenes 1/2а
  20. Listeria monocytogenes 4b

Результат: качественно, отдельно по каждой позиции в формате: «Отрицательный» или «Положительный».

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: невропатологи, инфекционисты и др.

Мозаика «Инфекционный артрит», (IgG), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител класса IgGк следующим инфекциям:

  1. Varicella zoster virus
  2. Influenza virus type A (H1N1)
  3. Influenza virus type A (H3N2)
  4. Influenza virus type B
  5. Yersinia enterocolitica O:3
  6. Yersinia enterocolitica O:6
  7. Yersinia enterocolitica O:9
  8. Toxoplasma gondii
  9. Borrelia afzelii
  10. Borrelia burgdorferi sensu stricto
  11. Borrelia garinii
  12. Chlamydia trachomatis

Результат: качественно, отдельно по каждой позиции в формате: «Отрицательный» или «Положительный».

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: ревматологи, инфекционисты, терапевты и др.

Антитела (IgG) к вирусу Varicella Zoster (VZV), иммунофлюоресценция

Это определение наличия антител класса IgG к вирусу Varicella Zoster (VZV).

Результат: качественно, в формате: «Отрицательный» или «Положительный».

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: инфекционисты, невропатологи, терапевты и др.

Mозаика TORCH, (IgG), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител класса IgGк следующим TORCH–инфекциям:

  1. Toxoplasma gondii
  2. Rubella virus
  3. HSV type1/2
  4. CMV

Результат: качественно, отдельно по каждой позиции в формате: «Отрицательный» или «Положительный».

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: инфекционисты, гинекологи и др.

IgGк Treponemapallidum (РИФ)

Это определение наличия антител класса IgG к Treponema pallidum (РИФ).

Результатполуколичественно: отрицательный/слабоположительный (2+)/ положительный (3+ или 4+)

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: инфекционисты, дерматологи, венерологии др.

IgМ к Treponemapallidum (РИФ)

Это определение наличия антител класса IgМ к Treponema pallidum (РИФ).

Результат полуколичественно: отрицательный/ слабоположительный (2+)/ положительный (3+ или 4+)

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: инфекционисты, дерматологи, венерологи и др.

Скрининг – ANA (антинуклеарные антитела), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител к ядерным компонентам клетки (диагностика системной красной волчанки, с-ма Шёгрена, поли/дерматомиозита, склеродермии и др.).

Результат: качественно.

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: терапевты, ревматологи, нефрологи и др.

Скрининг – ANCA (Антинейтрофильные цитоплазматические антитела), иммунофлюоресценция (РНИФ)

Это определение наличия антител к цитоплазматическим антигенам (диагностика васкулитов (гранулематоз Вегенера, микроскопический полиангиит, синдром Черджа-Страусс, «pauci-immune» некротизирующий гломерулонефрит, узелковый полиартериит), неспецифического язвенного колита.

Результат: качественно.

Исследуемый материал: кровь (сыворотка).

Примечание: Лабораторное заключение содержит рекомендации по дальнейшей тактике проведения лабораторных исследований для уточнения положительного результата в количественном/полуколичественном формате.

Специалисты, которых может заинтересовать исследование: терапевты, ревматологи, нефрологи, гастроэнтерологи, отоларингологи и др.

голоса
Рейтинг статьи
Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector